सेल कल्चर संदूषण को प्रभावी ढंग से कम किया गया था

सेल संस्कृतियों का संदूषण सेल संस्कृति प्रयोगशालाओं में आसानी से सबसे आम समस्या बन सकता है, कभी-कभी बहुत गंभीर परिणाम पैदा करता है।सेल कल्चर संदूषकों को दो श्रेणियों में विभाजित किया जा सकता है, रासायनिक संदूषक जैसे मध्यम, सीरम और पानी की अशुद्धियाँ, एंडोटॉक्सिन, प्लास्टिसाइज़र और डिटर्जेंट, और जैविक संदूषक जैसे बैक्टीरिया, मोल्ड्स, यीस्ट, वायरस, माइकोप्लाज़्मा क्रॉस संक्रमण।अन्य सेल लाइनों द्वारा दूषित।हालांकि संदूषण को पूरी तरह से खत्म करना असंभव है, लेकिन इसके स्रोत को अच्छी तरह से समझने और अच्छी सड़न रोकने वाली तकनीकों का पालन करके इसकी आवृत्ति और गंभीरता को कम किया जा सकता है।

1. यह खंड मुख्य प्रकार के जैविक संदूषण की रूपरेखा देता है:
विषाणु दूषण
मोल्ड और वायरस संदूषण
माइकोप्लाज्मा संदूषण
खमीर संदूषण

1.1 जीवाणु संदूषण
बैक्टीरिया सर्वव्यापी एकल-कोशिका वाले सूक्ष्मजीवों का एक बड़ा समूह है।वे आम तौर पर व्यास में केवल कुछ माइक्रोन होते हैं और गोलाकार से छड़ और सर्पिल तक विभिन्न आकारों में आ सकते हैं।उनकी सर्वव्यापकता, आकार और तेजी से विकास दर के कारण, बैक्टीरिया, यीस्ट और मोल्ड के साथ, सेल कल्चर में सबसे आम जैविक संदूषक हैं।

1.1.1 जीवाणु संदूषण का पता लगाना
संक्रमित होने के कुछ दिनों के भीतर संस्कृति के दृश्य निरीक्षण से जीवाणु संदूषण का आसानी से पता चल जाता है;
संक्रमित संस्कृतियां आमतौर पर बादल (यानी, अशांत) दिखाई देती हैं, कभी-कभी सतह पर एक पतली फिल्म होती है।
कल्चर माध्यम के पीएच में अचानक गिरावट का भी अक्सर सामना करना पड़ता है।
एक कम शक्ति वाले माइक्रोस्कोप के तहत, बैक्टीरिया कोशिकाओं के बीच छोटे, गतिमान कणिकाओं के रूप में दिखाई देते हैं, और एक उच्च शक्ति वाले माइक्रोस्कोप के तहत अवलोकन व्यक्तिगत बैक्टीरिया के आकार को हल कर सकता है।

1.2मोल्ड और वायरस संदूषण
1.2.1 मोल्ड संदूषण
फफूँद फफूंद साम्राज्य के यूकेरियोटिक सूक्ष्मजीव हैं जो बहुकोशिकीय तंतुओं के रूप में विकसित होते हैं जिन्हें हाइफ़े कहा जाता है।इन बहुकोशिकीय तंतुओं के संयोजी नेटवर्क में आनुवंशिक रूप से समान नाभिक होते हैं जिन्हें कॉलोनियां या मायसेलियम कहा जाता है।

खमीर संदूषण के समान, कल्चर का पीएच संदूषण के प्रारंभिक चरण के दौरान स्थिर रहता है और फिर तेजी से बढ़ता है क्योंकि कल्चर अधिक गंभीर रूप से संक्रमित हो जाता है और बादल बन जाता है।माइक्रोस्कोप के तहत, मायसेलियम आमतौर पर फिलामेंटस होता है, कभी-कभी बीजाणुओं के घने समूहों के रूप में।कई सांचों के बीजाणु अपने सुप्त अवस्था के दौरान अत्यंत कठोर और दुर्गम वातावरण में जीवित रह सकते हैं और तभी सक्रिय होते हैं जब सही विकास की स्थिति का सामना करना पड़ता है।

1.2.2 वायरस संदूषण
वायरस सूक्ष्म संक्रामक एजेंट होते हैं जो प्रजनन के लिए मेजबान सेल की मशीनरी पर कब्जा कर लेते हैं।उनका बेहद छोटा आकार उन्हें संस्कृति में पता लगाने और सेल संस्कृति प्रयोगशालाओं में इस्तेमाल होने वाले अभिकर्मकों से निकालने में मुश्किल बनाता है।चूँकि अधिकांश विषाणुओं को अपने मेजबानों के लिए बहुत सख्त आवश्यकताएं होती हैं, वे आम तौर पर मेजबान के अलावा अन्य प्रजातियों की सेल संस्कृतियों पर प्रतिकूल प्रभाव नहीं डालते हैं।
हालांकि, वायरस से संक्रमित सेल कल्चर का उपयोग प्रयोगशाला कर्मियों के स्वास्थ्य के लिए गंभीर खतरा पैदा कर सकता है, खासकर अगर मानव या प्राइमेट कोशिकाओं को प्रयोगशाला में उगाया जाता है।

सेल संस्कृतियों में वायरल संक्रमण का पता इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, एंटीबॉडी के एक सेट के साथ इम्यूनोस्टेनिंग, एलिसा, या उचित वायरल प्राइमरों के साथ पीसीआर द्वारा लगाया जा सकता है।

1.3 माइकोप्लाज्मा संदूषण
माइकोप्लाज़्मा कोशिका भित्ति के बिना साधारण जीवाणु होते हैं, और उन्हें सबसे छोटा स्व-प्रतिकृति जीव माना जाता है।उनके बेहद छोटे आकार (आमतौर पर 1 माइक्रोन से कम) के कारण, माइकोप्लाज्मा का पता लगाना तब तक मुश्किल होता है जब तक कि वे अत्यधिक उच्च घनत्व तक नहीं पहुंच जाते हैं और सेल संस्कृतियों को बिगड़ने का कारण नहीं बनते हैं;तब तक, आमतौर पर संक्रमण का कोई स्पष्ट संकेत नहीं होता है।

1.3.1 माइकोप्लाज्मा संदूषण का पता लगाना
कुछ धीमी गति से बढ़ने वाले माइकोप्लाज़्मा कोशिकाओं की मृत्यु के बिना संस्कृतियों में बने रह सकते हैं, लेकिन वे संस्कृतियों में मेजबान कोशिकाओं के व्यवहार और चयापचय को बदल देते हैं।

जीर्ण माइकोप्लाज्मा संक्रमण को कम सेल प्रसार दर, कम संतृप्ति घनत्व और निलंबन संस्कृति में समूहन की विशेषता हो सकती है।
हालांकि, माइकोप्लाज्मा संदूषण का पता लगाने का एकमात्र विश्वसनीय तरीका फ्लोरोसेंट स्टेनिंग (जैसे, होचस्ट 33258), एलिसा, पीसीआर, इम्यूनोस्टेनिंग, ऑटोरैडियोग्राफी, या माइक्रोबियल परीक्षण का उपयोग करके नियमित रूप से संस्कृति का परीक्षण करना है।

1.4 खमीर संदूषण
खमीर कवक साम्राज्य के एकल-कोशिका वाले यूकेरियोट्स हैं, जिनका आकार कुछ माइक्रोन (आमतौर पर) से लेकर 40 माइक्रोन (शायद ही कभी) होता है।

1.4.1 खमीर संदूषण का पता लगाना
बैक्टीरियल संदूषण के साथ, खमीर से दूषित कल्चर बादल बन सकते हैं, खासकर अगर संदूषण एक उन्नत चरण में हो।खमीर से दूषित संस्कृतियों का पीएच तब तक बहुत कम बदलता है जब तक कि संदूषण अधिक गंभीर न हो जाए, जिस चरण में पीएच आमतौर पर बढ़ जाता है।माइक्रोस्कोप के तहत, खमीर व्यक्तिगत अंडाकार या गोलाकार कणों के रूप में प्रकट होता है और छोटे कणों का उत्पादन कर सकता है।

2. क्रॉस संक्रमण
यद्यपि माइक्रोबियल संदूषण के रूप में सामान्य नहीं है, हेला और अन्य तेजी से बढ़ने वाली सेल लाइनों के साथ कई सेल लाइनों का व्यापक क्रॉस-संदूषण गंभीर परिणामों के साथ स्पष्ट रूप से परिभाषित समस्या है।प्रतिष्ठित सेल बैंकों से सेल लाइनें प्राप्त करें, नियमित रूप से सेल लाइनों की विशेषताओं की जांच करें, और अच्छी सड़न रोकने वाली तकनीकों का उपयोग करें।ये अभ्यास आपको क्रॉस-संदूषण से बचने में मदद करेंगे।डीएनए फ़िंगरप्रिंटिंग, कैरियोटाइपिंग और आइसोटाइपिंग इस बात की पुष्टि कर सकते हैं कि आपके सेल कल्चर में क्रॉस-संदूषण है या नहीं।

यद्यपि माइक्रोबियल संदूषण के रूप में सामान्य नहीं है, हेला और अन्य तेजी से बढ़ने वाली सेल लाइनों के साथ कई सेल लाइनों का व्यापक क्रॉस-संदूषण गंभीर परिणामों के साथ स्पष्ट रूप से परिभाषित समस्या है।प्रतिष्ठित सेल बैंकों से सेल लाइनें प्राप्त करें, नियमित रूप से सेल लाइनों की विशेषताओं की जांच करें, और अच्छी सड़न रोकने वाली तकनीकों का उपयोग करें।ये अभ्यास आपको क्रॉस-संदूषण से बचने में मदद करेंगे।डीएनए फ़िंगरप्रिंटिंग, कैरियोटाइपिंग और आइसोटाइपिंग इस बात की पुष्टि कर सकते हैं कि आपके सेल कल्चर में क्रॉस-संदूषण है या नहीं।